2009-2010 sezonu Türkiye Kupası 2.kademe müsabakalarının kura çekimi İstanbul Maslak Sheraton Otel'de gerçekleştirildi. Türkiye Kupası 2. kademe maçları 30 Eylül 2009 tarihinde oynanacak. Malatyaspor, Rize'de Rizespor'la karşılaşacak.
Kura çekimine, 1. Kademe maçları sonunda tur atlayan 18 takım, geçen sezon Bank Asya 1. Lig'de oynayan ve Süper Lig'e yükselemeyen 15 takım ile Süper Lig'den Bank Asya 1. Lig'e düşen 3 takım katıldı.
Tek maç eliminasyon sistemine göre yapılacak 2. kademe maçları sonucunda tur atlayan 18 takım, play-off turuna kalacak. Play-off turunun ardından Türkiye Kupası gruplarına kalan 20 takım belli olacak
2009-2010 sezonu Türkiye Kupası 2. kademe müsabakaları şöyle:
Çaykur Rizespor - Malatyaspor
Turgutluspor - Konya Şekerspor
Tokatspor - Kocaelispor
Adıyamanspor - Yalovaspor
Belediye Vanspor - Şanlıurfaspor
Denizli Belediyespor - Trabzon Karadeniz
Güngören Belediye - Beykoz 1908 A.Ş.
Adanasspor A.Ş. - Dardanelspor
Kastamonuspor - Boluspor
Samsunspor - KDÇ Karabük
Bucaspor - Sakaryaspor
Kartalspor - Karşıyaka
Eyüpspor Mersin İdman Yurdu
Gaziantep Büyükşehir Belediyesi - Tarsus İdman Yurdu
Giresunspor - Hacettepespor
Orduspor - Pursaklar A.Ş.
Konyaspor - Altay
İnegölspor - Kayseri Erciyesspor
